使用磁性纳米颗粒进行核酸运送

材料

试剂司）的操作手册。对聚阳离子或聚阴离子包被的磁性颗粒，如CombiMAG,不需要对载体进行亲和素偶联。病毒载体可以使用亲和素偶联，并且使用相应的链霉亲和素蛋白包被磁性颗粒。或者将载体与磁性颗粒共孵育即可[最好使用阳离子包被磁性颗粒，但是阴离子包被颗粒可用于慢病毒（Hairnetal.2005)]。

磷酸盐缓冲液（PBS)，HEPES缓冲盐溶液（HBS)，0.9%的NaCl,或用于载体制备的无血清细胞培养基。

转染试剂的选择

仪器

37°C细胞孵箱

微量离心管

永久磁体

稀土永久磁体(rareearthpermanentmagnet)是最合适的磁体，例如，钦铁硼磁体(neodymiumironboronmagnet)。制造厂商包括IBSMagnet(柏林，德国），DexterMageticTechnologies(芝加哥，伊利诺伊州），BisbellMagneticproductLtd.(Burton-on-Trent,英国），或者amfmagnetiC(Masc〇t,澳大利亚）。设计和优化用于磁力转染的磁碟已经商业化生产,可以从OZBioscience(Marseille，法国；www.ozbioscience.com)或chemicell(柏林，德国；WWW.chemicell.com)购买。

最实用的磁片是圆形的，直径〇.5cm、lcm、1.5cm、2cm或更大，厚度0.5cm。长方体磁片的尺寸为2cmXlcmX0.5cm。

注意：稀土永久磁体会产生永久的磁场，必须小心操作。这些磁体可以删除磁

存储设备，干扰电子或电子机械设备（如心脏起搏器）的正常工作。细胞培养器皿的选择参见表1。

方法对每一种磁性颗粒和载体类型，磁性颗粒与基因载体的比例必须进行优化。具体的优化方法参见www.ozbiosciences.com.

1.用去离子水制备lmg/ml的磁性纳米颗粒。

多数厂商提供的磁性纳米颗粒以不同浓度（mg/ml)的液体悬浮溶液形式提供。多聚阳离子和多聚阴离子包被的磁性颗粒在含盐溶液中会自发聚集。

2•计算需要的磁性纳米颗粒的量。对非病毒载体，按每微克核酸使用〇.2〜4ug外层包被的磁性颗粒进行运送；15ug聚氮丙啶（polyethylenimine)包被的磁性颗粒足以结合IXlO¹⁰的腺病毒颗粒。不同培养器皿推荐加入的核酸剂量、非病毒载体转染参见表1，病毒载体磁力转染见表2。加入需要量的磁性颗粒到一个微量离心管中。